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病毒沉淀劑

  • 產品貨號:CS-01F96321
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:國產
  • 包裝類型:盒裝
  • 采購熱度:777
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:
  • 含量:100mL
  • 品牌名稱:莼試
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簡介內容:病毒沉淀劑現貨供應,價格實惠。

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標簽:病毒沉淀劑 100mL 

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產品屬性:
產品名稱 英文名稱 規格 貨號
病毒沉淀劑 Virus Precipitation Reagent 100mL CS-01F96321
生物醫學實驗中,常常需要從液體樣品(如血漿,培養基)中純化病毒,但由于病毒顆粒十分細小,傳統的分離方法是使用長時間超速離心才能將其從液體樣品中分離出來,此操作非常繁瑣,并且病毒在此過程中容易變性。為了克服傳統方法的缺點,本公司開發了本產品。
產品特點
能濃縮病毒100倍以上,適合各種病毒。
比超速離心法、密度梯度離心分離法和過濾法更溫和,回收率更高,并且大部分病毒能保持活性,適合各種后續實驗,包括轉染實驗和核酸純化。
比超速離心法和密度梯度離心分離法簡單,不需要大型離心機等設備。
適合水樣、細胞培養基上清和其他不含細胞的樣品。本產品100mL可以處理400mL含病毒的溶液,可以將病毒濃縮100倍以上。
已經成功用于coronaviruses、rhabdoviruses、parainfluenzaviruses、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。
對環境水樣,請不要使用本產品,而是使用水體病毒沉淀劑。
儲存條件:常溫運輸和保存,有效期一年。
自備試劑
PBS緩沖液或TES緩沖液(用于重懸病毒)
使用方法
注意:需要盡量減少含病毒溶液中蛋白的濃度。收集培養細胞分泌的病毒前,最好換上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培養基。
將培養細胞刮下,和培養基一起全部轉移到干凈的離心管中,10000rpm 4℃離心20分鐘。轉移上清(含病毒)到新離心管中。如果培養細胞內還有病毒顆粒,并且病毒顆??梢缘挚箖鋈?,則可以把細胞凍融數次,釋放出包漿的病毒,然后再轉移到干凈的離心管中,10000rpm 4℃離心20分鐘。轉移上清(含病毒)到新離心管中。如果病毒溶液不含細胞成分,則直接進入下一步。
在含病毒的上清中加入1/4總體積的本產品(4mL病毒溶液則加1mL本產品),4℃冰箱中放置過夜或12小時以上。病毒在此期間將形成沉淀。
10000rpm 4℃離心20分鐘收集病毒沉淀,盡可能棄掉所有上清(可以暫時保留上清,等確認病毒濃縮成功后再丟棄)。
將離心管放回離心機短暫離心數秒,再次小心去除殘留上清。
將沉淀(病毒顆粒)溶于適量預冷的自備的緩沖液(如PBS緩沖液、TES緩沖液和培養基中,取決于后續實驗),立即使用或者-20℃長期保存。
實驗步驟:
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養細胞 直接在培養板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物完全分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙醇,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。

 

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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