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DH5α 感受態細胞說明書

  • 產品貨號:CS-G001
  • 產品價格:電議
  • 產品產地:進口、國產
  • 包裝類型:瓶裝
  • 采購熱度:2704
  • 庫存:100
  • CAS號:
  • 方法:細胞
  • 含量:
  • 品牌名稱:莼試
  • 分子式:
  • 分子量:

簡介內容:DH5α 感受態細胞品牌現貨供應,公司產品僅用于科研。

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標簽:DH5α 感受態細胞說明書 DH5α 感受態細胞廠家 

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以下是感受態細胞的訂購信息:
產品名稱 DH5α 感受態細胞
規格1 100ul*20
規格2 100ul*100
使用說明:
1. 取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。
2.待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30min。
3. 42℃熱擊45sec,然后快速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3min,該過程不要搖動離心管。
4.每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床, 150 rpm振蕩培養45~60min使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12~16h。

DH5α 感受態細胞培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。

DH5α 感受態細胞操作方法  
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發,待乙醇揮發干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。  
2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘,待其融化,加入1-5ug質粒DNA(質粒體積不大于6ul,最好用試劑盒抽提,雙蒸水溶解),用手撥打管底混勻,立即插入冰中,用200ul槍頭將感受態-質?;旌衔锟焖僖频诫姄舯?,蓋上杯蓋,空管保留待用。  
3.啟動電轉儀,設置參數:C=25uF,PC=200ohm,V=2400V(此參數為Biorad推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700ul無抗生素的LB并轉移到感受態空管中,28℃振蕩培養2~3小時。  
4.6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天(當平板只含有50ug/mlkan時,28℃培養48h即可;平板中同時加入50ug/mlkan,20ug/mlrif時,需28℃培養60h;如果使用的平板含有50ug/mlrif則需要28℃培養72-90h)。 

原創作者:上海莼試生物技術有限公司

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3、進口原裝產品要3-6周的貨期,詳細情況請咨詢客服。

  

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